Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次单单现口内神经性到单单现1同型白血病外科疼痛的困难重重赴援在青少年时期就有很好的描绘单单，多个口内神经性乙型肝炎的青少年里面有70%在血清匹配后10年内患上白血病，而随访15年的青少年这一数量减低到84%。相较之下，占外科1同型白血病一半以上的同型1同型白血病的病症有助于还没有得到充分的数据分析。

更加多的人开始用作分期系统来定义1同型白血病的困难重重：个体在单单现多种口内神经性时转回第1先前，单单现血糖异常时转回第2先前，单单现疼痛时转回第3先前。一些多发口内神经性乙型肝炎的个体，在1期和2期，困难重重更快，并持续发展为病症的1同型白血病。我们先前描绘单单了一分组在首次检验到多种口内神经性样本后有数10年无白血病的更快困难重重者，这分组病变人数少，但形态非常说明。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞自由基在困难重重加速的病变里面大体不存在，但在近期病症和仍然存在的白血病病变里面很容易检验到。这可能说明，与困难重重病变相较，这些病变神经性自由基的调控增强。

最初数据分析说明，尽管调控性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但白血病病变存在一些机能缺陷，其里面包括对IL-2的自由基意志力减低。此外，白血病病变里面的畸变CD4+T巨噬细胞可能对调控更具抵抗性，乏善可陈为畸变T巨噬细胞的依赖性增强，自然激发的Treg和体外激发的其会Treg，以及抗原年里面的CD4+T巨噬细胞里面IL-2自由基增强。本数据分析的目的是描绘单单了CD4+调控性T巨噬细胞(Treg)在一小群却是加速困难重重者里面的形态，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

步骤：BOX数据分析是一项以许多人为基础的纵向数据分析，在21岁以下确诊的病变亲属里面检查和1同型白血病的危险性因素所。我们先前描绘单单了仍然加速困难重重者的形态，他们维持多重口内神经性乙型肝炎超过10年，但没有单单现白血病的外科疼痛，快性或非进行时性神经性。随后，10名继续维持无白血病并不想提供大量血液样本的加速困难重重者纳入T和B巨噬细胞机能数据分析。在目前为止的数据分析里面，8名快困难重重者(SP分组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的口内神经性乙型肝炎。所有的参加者都位处1同型白血病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了口内神经性对某些抗原的施打，然而，一名病变之前位处2期有数6年，但没有单单现外科疼痛，一名病变被诊断为白血病，该测试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该小分子进行时了大体上审核能。分开外周血单个核能巨噬细胞(PBMCs)，采用多匹配流式巨噬细胞精和T巨噬细胞依赖性试验中审核能小分子里面Treg的频赴援、表同型和机能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)进行时无监督聚类数据分析，审核能Treg表同型。

结果：与心理健康小分子相较，来自快困难重重体的清醒CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，激光阴的清醒CD4+ Treg频赴援减低，与糖皮质激素其会的TNFR相关复合物(GITR)表达出来减低有关。一名HbA1c升温的病变与困难重重加速者和匹配的对照分组相较，Treg小曲有所多种不同。机能数据分析说明，与心理健康小分子相较，来自加速困难重重体的Treg内源性的CD4+畸变T巨噬细胞依赖性明显损坏。乏善可陈为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表达出来的依赖性减低。

示意图1 深入的表同型数据分析推断，CD4+Treg亚同型在快困难重重字段里面减低。由FlowSOM作用于的Treg房，聚集在来自所有小分子的光阴CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标上物表达出来鉴别单单10个元簇:清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个键值均是由一个战斗群(100个战斗群)，相当大的元战斗群(10个元战斗群)在键值分组区域内剪裁。每个键值里面的饼示意图问到单个标上的表达出来级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体标上表达出来。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于示意图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的表层。(e-l)相较总质量为每个metacluster装有中央线示意图(总质量> 0.05%)确认为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T巨噬细胞(l)。深橙色白点均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核能查。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模同型推测，Treg频赴援的减低是困难重重加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的均是由性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来进行时分开，各种类型FlowSOM社群。(b) HD(环纹)和SP(白斑)分组以及小分子SP 606(深橙色)里面CD25+ cd127的频赴援概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装有中央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑橘簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来准确度着色，箭头突单单的簇被辨别为SP和HD字段间的多种不同。(j)装有中央线示意图推断了在SP(白斑)和HD(灰点)分组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较总质量(数量)。(k)直方示意图推断每个簇的表同型(粉红色)和Treg标上相较表达出来与取材表达出来(橙色);上列，磁盘Treg_3;示意图动身，磁盘Treg_4。取材与所有其他簇里面标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核能查

示意图3 与心理健康献血者相较，困难重重加速者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T巨噬细胞元簇(清醒T巨噬细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +清醒T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达出来标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表达出来热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)的FlowSOM GITR表达出来串连，推断直方示意图(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和核能查，p< 0.07(深橙色)所有小分子包括，p< 0.05(橙色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)串连，推断直方示意图(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核能查

示意图4 来自加速困难重重的CD4+ treg巨噬细胞遏制畸变CD4+T巨噬细胞的意志力减低。SP分组用橙色的中央线和白点问到，HD分组用粉红色的中央线和白点问到，深橙色的中央线/白点问到小分子sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被标上为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养单单来3天内进行时流式巨噬细胞精检验。(a-d)与CD4+；也者相较应的treg培养单单来(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养单单来。(a,b,f) CFSE其会(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。用作乙型肝炎对照(激光阴的响应巨噬细胞不含treg)计算依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 畸变CD4+T巨噬细胞对加速困难重重的T巨噬细胞重置的依赖性更敏感。SP分组用橙色的中央线和白点问到，HD分组用粉红色的中央线和白点问到，深橙色的中央线/白点问到小分子sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标上，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养单单来3天内进行时流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因叔父数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同完成培养单单来。(a,b) CFSE其会(a)和CFSE依赖性百分赴援(b)。(c,d) CD25依赖性百分赴援(c)和CD134依赖性百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计单单来里面的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自加速困难重重叔父的重置清醒CD4+Treg在GITR表达出来里面得到了扩充和非常丰富，合理化了再进一步数据分析Treg在1同型白血病可能会个体里面的异质性的必要性。

中文翻译单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28